用液相的时候发现，一步步按照要求跑出来的峰却“胖胖的”，细数影响峰形的因素：流动相的组成和pH？色谱柱的污染、堵塞或塌陷？方法中的进样量、流速和采集频率？碱性化合物和硅羟基的次级作用？溶剂效应？组分共流出？排查时不怕不正常，就怕都正常，此时内心只想仰天长啸一句“为什么”？其实，还有一个隐藏更深且更常见的因素：死体积。

1、什么是死体积？

死体积是色谱优化过程中的重要指标。死体积狭义上是指在色谱分析中，从‌进样器到‌检测器之间，色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置（进样口）到检测位置（检测器流通池）这一段的体积（PS:除去色谱柱中填料体积），一旦色谱柱连接，这段体积（图示橙色管路）是不变的（死的）。

2、死体积有哪些影响？

死体积主要会导致峰展宽，从而影响分离度。若峰展宽大，峰就会变矮变胖，分离效果自然就会受到影响。

3、死体积怎么计算？

对于HPLC来说，该如何计算死体积呢？先来一起了解一下定义：死体积(dead volume，V₀)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，V_m）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有V_m参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。死时间(dead time，t₀)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间（t₀），这就是t0的实测结果。然后通过计算得到系统死体积：

死体积（V₀) = 死时间t₀×流动相的流速F

4、怎样消除死体积的影响？

减少死体积的方法主要包括：减少连接管路的长度，缩小连接管路的直径，用死体积小的检测池，用粒度小的色谱填料。在减少管路长度的过程中，就特别考验大家的经验与手法，另外，液相使用处处皆细节，在日常操作和维护中，要注意：

（1）在我们维护仪器的过程中，如果涉及到备件更换，应选择跟原来一致的规格，确保新管线的长度和内径、流通池体积等规格一致，且正确安装，避免死体积增加带来峰形扩展；

（2）接装色谱柱时，也需要确保管线接头匹配完好（特别注意peek管接头的使用）避免形成接头空腔；

（3）如果色谱柱内径越窄，体积越小，则受柱外死体积的影响越大。所以，在选择或安装色谱柱时，需要确保管线接头与色谱柱的接头匹配，避免因额外的混合腔造成死体积增加带来峰形扩展。